人巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)前樣本的處理方法在收集樣本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測的樣本，及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆谩?duì)于隔天再檢測的樣本，及時(shí)分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆茫袟l件的，最好-70℃凍存?zhèn)溆谩?biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融。
液體類標(biāo)本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘后、離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)、仔細(xì)收集上清、保存過程中如有沉淀形成、應(yīng)再次離心。
2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑、混合10-20分鐘后、離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)、仔細(xì)收集上清、保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
3.尿液:用無菌管收集、離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)、仔細(xì)收集上清、保存過程中如有沉淀形成、應(yīng)再次離心、胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時(shí)、用無菌管收集、離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)、仔細(xì)收集上清。
5.培養(yǎng)細(xì)胞:檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)、用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液、細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右、通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑、以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份、離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)、仔細(xì)收集上清、保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
6.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后、稱取重量、加入一定量的PBS、PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度、加入一定量的PBS(PH7.4)、或組織蛋白萃取試劑、用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化、離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)、仔細(xì)收集上清、分裝后一份待檢測、其余冷凍備用。
人巨噬細(xì)胞集落刺激因子試劑盒操作：
人巨噬細(xì)胞集落刺激因子試劑盒使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。在450nm波長處測定各孔的OD值。局限6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到精確的結(jié)果。
人巨噬細(xì)胞集落刺激因子試劑盒性能：
1、靈敏度：最小的檢測濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為1.0 pg/mL。
2、特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3、重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
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